Условията на живот в лагера са ужасни, както е обичайно за нацистките лагери на смъртта. Затворниците са хранени много малко, не им се дават достатъчно дрехи или подслон, за да се стоплят, нямат здравни грижи и са малтретирани от усташките надзиратели. Също така, както в много други лагери, условията се подобрявали временно, когато специални групи ги посещавали. Например при посещението на представители на пресата през февруари 1942 г. и по-късно при посещението на делегация на Червения кръст през юни 1944 г. затворниците са третирани по-добре, докато посетителите не си тръгнат. След това условията на живот се връщат към обичайните.
Храна
Както във всички нацистки лагери на смъртта, храната, която се дава на затворниците в Ясеновац, не е достатъчна, за да ги поддържа живи. С течение на времето видът на храната, която им се дава, се променя. В лагера Брочице затворниците са получавали "супа", приготвена от гореща вода с нишесте за закуска, и боб за обяд и вечеря. (Тези "ястия" се сервирали в 6:00, 12:00 и 21:00 ч.) Храната в лагер № III отначало била по-добра, с картофи вместо боб. През януари обаче затворниците започнали да получават само по една дневна порция рядка "супа от ряпа". Към края на годината диетата отново е променена - на три дневни порции рядка каша, приготвена от вода и нишесте. Направени са още промени, но затворниците никога не получават достатъчно храна, за да не гладуват.
Вода
Водата в Ясеновац е дори по-лоша от тази в повечето лагери на смъртта. В лагера не е имало чиста вода. Затворниците са били принудени да пият вода от река Сава, която е била замърсена с хрян.
Подслон
В първите лагери, Брочице и Крапе, затворниците спят в обикновени бараки за концентрационни лагери. Те са били направени от дърво и са имали три етажа (нива) от легла.
В лагер № III, в който са настанени около 3000 затворници, няма достатъчно подслон за всички. Първоначално затворниците спели по таваните на работилниците на лагера, в открито депо, използвано като железопътен "тунел", или просто на открито. Малко по-късно са построени осем бараки. Затворниците спят в шест от тези бараки. Другите две са били използвани като "клиника" и "болница". Това не били места, където затворниците можели да получат медицинска помощ и да се излекуват. Това са били места, където болните затворници са били събрани заедно, за да умрат или да бъдат убити.
Принудителен труд
Както във всички концентрационни лагери, затворниците в Ясеновац работят по около 11 часа на ден. Те полагат тежък, принудителен труд и винаги са наблюдавани от охраната на усташите. Тези пазачи екзекутирали затворниците дори по незначителни причини и казвали, че затворниците "саботират труда".
Усташи Хинко Доминик Пицили и Тихомир Кордич контролираха родилната секция. Пицили лично биел затворниците, за да ги накара да работят по-усилено. Той разделя "Трудовата сила на Ясеновац" на 16 групи, включително групи от строителни работници, тухлари, металурзи и селскостопански работници. Много затворници умират от тежката работа. Особено тежка и опасна била работата с тухли. Затворниците, работещи като ковачи, били принудени да изработват ножове и други оръжия за усташите. Строителството на диги било най-страшната работа от всички.
Саниране
Вътре в лагера нямаше никакви санитарни условия. Затворниците нямало как да поддържат чистота и трябвало да живеят в ужасни условия. Кръв, повръщано и мъртви тела изпълвали бараките. Бараките били пълни и с вредители като въшки и плъхове, които разпространявали болести. Бараките миришеха ужасно, защото затворниците трябваше да използват кофа за тоалетна през вечерите. Кофата често се разливала.
По време на почивките от работа (от 5:00 до 6:00 ч., от 12:00 до 13:00 ч. и от 17:00 до 20:00 ч.) на затворниците е позволено да изпразват червата си в обществени тоалетни. Това били големи ями, които се намирали на открито поле, покрити с дървени дъски. Затворниците често падали вътре и умирали. Усташите насърчавали това, като карали затворниците да разделят дъските. Понякога усташите дори топели затворниците в ямите. При дъжд тези ями преливали и се вливали в езерото. Това означавало, че урината и изпражненията се смесвали с водата, която затворниците трябвало да пият.
На затворниците се дават парцали и одеяла, но те са много тънки. Бараките също не са били достатъчни, за да се стоплят затворниците от студа. Дрехите и одеялата на затворниците рядко били почиствани. На затворниците се разрешавало да ги изперат набързо в езерото веднъж месечно, освен през зимата, когато езерото замръзвало. Тогава на затворниците понякога се разрешавало да изварят няколко дрехи, но не достатъчно добре, за да ги изперат.
Заради тези ужасни условия на живот затворниците страдат от болести, които водят до епидемии от тиф, коремен тиф, малария, белодробни инфекции, грип, дизентерия и дифтерия.
Вещи
Усташите прибрали всички дрехи и други вещи на затворниците. Дават им само затворнически униформи, направени от парцали. През зимата на затворниците давали тънки "дъждобрани" и им разрешавали да си правят леки сандали. Затворниците получавали по една малка лична купа за храна, в която да държат 0,4 литра "супа", с която ги хранели. Затворник, чиято купичка липсва (защото друг затворник я е откраднал, за да я използва като тоалетна), не получавал храна.
По време на посещенията на делегацията на затворниците бяха раздадени двойно по-големи от обичайното купи с лъжици. Също така по време на тези посещения на затворниците се даваха цветни етикети.
Тревожност
Затворниците изпитват постоянен страх от смъртта и ужасен стрес от това, че се намират в ситуация, в която живите и мъртвите са много близо един до друг.
Когато пристигат за първи път в лагера, затворниците са шокирани от ужасните условия по време на пътуването до лагера и в самия лагер. Усташите засилват този шок, като убиват редица затворници веднага след пристигането им в лагера и временно настаняват новопристигналите в складове, тавани, в тунела на влака и на открито.
След като затворниците се запознават с живота в лагера, те трябва да свикнат да преживяват трудностите, насилието, мъченията и смъртта на други затворници. Опасността от смърт е била най-голяма по време на "публичните представления за публично наказание", наричани още селекции. Затворниците се подреждали в групи и на случаен принцип се посочвали отделни лица, които да бъдат убити, докато са изправени пред останалите. Усташите влошавали ситуацията, тъй като процесът продължавал дълго. Те се разхождали и задавали въпроси; гледали затворниците; избирали едно лице, след това променяли решението си и избирали друго.
Затворниците реагират на престоя си в Ясеновац по два основни начина. Някои стават активисти. Те създават съпротивителни движения (групи, които се опитват да се борят с усташите по различни начини, като крадат храна, планират бягства и бунтове и се опитват да се свържат с хора извън лагера). Но повечето затворници реагираха, като просто се опитваха да оцелеят и да преживеят деня невредими. Това не е било "тръгване на опашка за клане", а по-скоро друга стратегия за опит за оцеляване.
Всички затворници са имали някакви психични проблеми. Някои от тях не можеха да спрат да мислят за храна, други изпадаха в параноя, трети имаха мании, четвърти губеха контрол над себе си. Други сякаш бяха загубили чувството си за надежда. Някои затворници реагираха, като се опитаха да напишат какво им се случва. Например Никола Николич, Джуро Шварц и Илия Иванович се опитвали да запомнят и дори да пишат за събития, дати и подробности. Това било много опасно, тъй като писането се наказвало със смърт, а проследяването на датите било трудно.
Повечето от екзекуциите на евреи в Ясеновац са извършени преди август 1942 г. След това МСК започва да депортира еврейски затворници в концентрационния лагер Аушвиц. Като цяло евреите са изпращани в Ясеновац първо от всички части на Хърватия, след като са били събрани в Загреб, и от Босна и Херцеговина, след като са били събрани в Сараево. Някои от тях обаче са изпратени директно в Ясеновац от други градове и по-малки населени места.